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请设计一个实验,从生物体内克隆一个功能基因,并对所克隆的基因及其表达产物进行全面鉴定.

网站编辑:亿讯SEO 发布时间:2022-05-22  点击数:
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请设计一个实验,从生物体内克隆一个功能基因,并对所克隆的基因及其表达产物进行全面鉴定.

wjmcse 1年前他留下的回答 已收到1个回答

asdjfJW 网友

该名网友总共回答了21个问题,此问答他的回答如下:采纳率:81%

首先确定要克隆基因的基因序列,然后设计引物(引物上带有酶切位点)→进行PCR,胶回收,酶切,再胶回收,得到带有粘性末端的目的基因→将目的片段连接到具有相同粘性末端的PET载体上
.得到目的蛋白:将连接好的带有目的片段的载体转入到DH5α菌系中,将菌涂布与相应的抗性LB培养过夜→挑菌→接到相应抗性的液态LB中,摇菌过夜→提取质粒,进行PCR鉴定与酶切鉴定确定转入的不是空质粒→送测→将的到地带有目的蛋白基因的质粒转入到BL21(DE3)菌系中→诱导表达蛋白→进行SDS-PAGE检测是否表达出正确大小目的蛋白→大量诱导→得到表达蛋白的DE3
.纯化目的蛋白:将菌进行超声破碎→引用Ni-His结合树脂4℃结合过夜→应用不同洗液洗脱得到纯化的目的蛋白→应用BSA对蛋白含量进行定量
应用得到的纯化目的蛋白150mg目的蛋白+弗氏完全佐剂对兔子进行一免,以后每次应用150mg目的蛋白+弗氏不完全佐剂加强免疫2-3次(两周加强一次)→最后一次免疫10天后采血→这样就制备得到兔高免血清
.纯化抗体(可做可不做):应用抗体纯化试剂盒对得到的血清进行纯化,得到纯化的兔免目的蛋白的多克隆抗

1年前他留下的回答

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  以上就是小编为大家介绍的请设计一个实验,从生物体内克隆一个功能基因,并对所克隆的基因及其表达产物进行全面鉴定. 的全部内容,如果大家还对相关的内容感兴趣,请持续关注亿讯SEO!

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